Sequencing Technical Support |
测序技术资料下载或在线浏览
说明：点击可在线浏览，点击右键可以选择目标另存：保存至本地磁盘可离线浏览。
测序的样品要求：
测序由于是要进行特殊的PCR反应的，因此对样品的要求与其他试验的要求有所不同分别简述之：
1. 样品的纯度：PCR具有短时间内高效的扩增能力，因此样品的纯度对反应有至关重要的影响。当样品不纯的时候，那些杂质会对实验结果产生干扰。这在PCR产物测序中表现的尤为明显，在测序结果上表现为峰图杂乱，过多的不可识别的碱基。
2. 样品的量：尽管测序反应可以高效的扩增待测得模板，使得测序所需要的模板量大大降低，但是当最低限度的模板量也不能提供的话，会引起测序反应的异常，表现为无反应，峰图弱，或者反应中断等。
3. 样品的形式：这里专指纯化的PCR产物和质粒样品。正常情况下，溶解样品时常用的溶液有以下几种形式：水，Tris 溶液，TE（Tris--EDTA）三种。当采用TE为溶剂的时候由于溶液中的EDTA可以干扰测序反应的进行，因此实验人员在进行测序时需要注意样品的溶解方式。
三、不同样品的要求及简介：
1. 样品的形式：从测序角度来讲最好是由实验者提供菌液的形式，由公司来提取质粒，这样可以保证DNA样品的数量和质量。如果实验者提供的是质粒或者是纯化后的PCR产物，则需要说明其浓度和溶解的方式（原因如上）
2. 不同样品的说明：
（1）PCR产物：若是PCR产物进行测序时，需要实验者同时提供PCR的双向引物各10ul（浓度>5uM/ul），这是因为PCR的引物要求与测序的引物有所不同，因此不能保证一条PCR引物就能够测成功。双向引物可以在一条引物无法测序的情况下，改用另一端的引物测序。这样一来，最好实验者告知公司一下反应的条件，以便测序公司可以及时调整测序反应。
（已纯化）浓度 > 50ng/μl、体积> 10 μl；
（未纯化）浓度 > 100ng/μl、体积> 30 μl；
引物要求：浓度>5uM、体积>10 μl
（2）质粒产物：需要提供明确的质粒名称，大小、浓度以及测序所用的引物名称，如果是自带引物测序（条件同PCR测序），最好也能够标明反应的条件。质粒的大小对于测序也有着一定的影响。样品中，质粒的总量不低于5ug。
（3）菌液：需要明确的标明所用的抗生素类型和培养条件，以便样品能够培养和扩增。