2-D（Two-Dimensional Electrophoresis）双向电泳-质谱技术服务

2-D双向电泳是目前为止最有效、使用最多的蛋白分离方法，是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段，已得到广泛应用。这项技术利用蛋白质的两种特性，分两步将不同的蛋白质分离。第一向步骤为等电聚焦（IEF），即根据蛋白质的等电点（pI）差异将蛋白质分离。第二向步骤为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），即利用蛋白质的分子量（Mr， 相对分子量）差异将蛋白质分离。双向凝胶电泳结果中的每个斑点都对应着样本中的一种蛋白。因此，可将上千种不同的蛋白质分离开来，并得到每种蛋白质的等电点、表观分子量和含量等信息。差异蛋白质组学是在双向电泳后用考马斯亮蓝、银离子或荧光染料等将蛋白斑点染色，然后比较差异。仪方生物在各类微生物、培养细胞、动植物组织（如动物软硬组织、体液、植物种子、叶子等）、亚细胞组分的双向电泳分离及后续质谱鉴定中均有丰富的经验。

服务项目和主要步骤：

1. 根据客户需求定制蛋白质组学实验方案。
2. 样品制备（蛋白提取）：主要包括植物、动物细胞或组织等的破碎、离心以及定量。
3. 第一向IEF等电聚焦实验。
4. 第二向SDS-PAGE实验。
5. 硝酸银染色或考马斯亮蓝染色。
6. 图像分析及数据处理。          
7. 提供双向电泳的正式实验报告。
8. 选取感兴趣的蛋白点进行酶解。
9. 对酶解后蛋白进行质谱技术分析（Maldi-Tof-Tof/MS）。
10. 提供质谱的正式实验报告。

结果报告：

1. 实验的试剂耗材、仪器设备、操作过程一份；
2. 实验结果凝胶扫描图片；
3. 电泳凝胶（可收费干胶）；
4. 剩余样本。

样品要求：

• 建议客户提供的原样（组织、细胞、菌体等）湿重不少于100mg，如直接提供蛋白提取物，则浓度不少于4ug/ul，总量不少于5mg。
• 样品需为可溶的固体蛋白或液体蛋白溶液，建议液体蛋白溶解体系为6M尿素,2M硫脲，/4％CHAPS/40mM Tris/65mM DTT。如溶解于其它缓冲液体系中，请应提供缓冲液成分。
• 单次硝酸银染色提供蛋白量不小于0.6mg；单次考马斯亮蓝染色提供蛋白量不小于2mg；总蛋白量不小于2mg。
• 用于一次制备型样品，动物组织或菌体的新鲜样本始终不小于1g；收集细胞数量不小于2×108；植物或真菌样品湿重不小于5g；
• 为避免蛋白样品降解，客户所寄的蛋白样本最好为冻干品，若为溶液蛋白，则需低温保存，血液血浆样品应贮于4℃保存，其它液体蛋白溶液贮于-20℃保存。
• 如样品中含有杂质例如核酸、脂类、多糖、色素类等或需其它特殊要求例如浓缩、透析等请提前告知，价格将视进一步处理的难度和耗材用量另行商定。